10ul接種環(huán)是微生物實驗中用于菌種接種、菌液轉(zhuǎn)移的核心工具，廣泛應(yīng)用于細菌培養(yǎng)、菌落計數(shù)、藥敏試驗等場景。其精準操作直接影響實驗結(jié)果的重復(fù)性與準確性，需嚴格遵循滅菌規(guī)范、取樣技巧、接種操作三大核心流程，具體指南如下。
滅菌是避免雜菌污染的關(guān)鍵步驟，10ul接種環(huán)需采用干熱滅菌或火焰滅菌兩種方式，優(yōu)先選擇火焰滅菌，操作便捷且滅菌完整。
1.火焰滅菌流程：將接種環(huán)固定在接種棒上，手持接種棒末端，將接種環(huán)伸入酒精燈外焰，緩慢旋轉(zhuǎn)灼燒至環(huán)體呈均勻紅熱狀態(tài)，灼燒時間不少于30秒，確保殺滅環(huán)體表面的所有微生物。灼燒時需注意接種棒握持角度，避免火焰灼燒接種棒手柄導(dǎo)致材質(zhì)碳化。
2.冷卻處理：滅菌后的接種環(huán)溫度較高，直接接觸菌液會導(dǎo)致菌體死亡，需在無菌培養(yǎng)基的空白區(qū)域輕輕觸碰冷卻，或靜置10–15秒自然降溫，冷卻過程中不可觸碰非無菌區(qū)域，防止二次污染。
3.重復(fù)滅菌要求：每次接種完成后，需再次灼燒滅菌，避免菌種交叉污染；連續(xù)多次接種不同菌株時，需更換接種環(huán)或滅菌后再使用。
二、10ul接種環(huán)液體掛取核心技巧
10ul接種環(huán)的環(huán)體容積精準對應(yīng)10μL液體，掛取時需控制力度與角度，確保液體量準確且不滴落，具體技巧如下。
1.掛取前狀態(tài)確認：冷卻后的接種環(huán)需保持干燥，若環(huán)體殘留水珠，會稀釋菌液濃度，導(dǎo)致取樣量不準?？蓪⒔臃N環(huán)在無菌空氣中輕晃，去除表面冷凝水。
2.液體掛取操作：手持接種棒，將接種環(huán)以30°–45°角緩慢浸入菌液或液體培養(yǎng)基中，確保環(huán)體全浸沒，避免僅觸碰液面導(dǎo)致掛液不足。隨后勻速緩慢提起接種環(huán)，此時環(huán)內(nèi)會自然形成一層液體薄膜，其體積即為精準的10μL。
若掛取高粘度液體（如含瓊脂的半固體培養(yǎng)基），可適當(dāng)降低浸入速度，防止液體粘連過多；若液體流動性強，提起后可在容器內(nèi)壁輕靠一下，刮除多余液體。
3.防滴落控制：掛取液體后，接種環(huán)需保持水平或略微向下傾斜，避免劇烈晃動。轉(zhuǎn)移過程中動作要平穩(wěn)，若液體出現(xiàn)滴落趨勢，可將接種環(huán)靠近容器內(nèi)壁，利用表面張力將液體回吸至環(huán)內(nèi)。
三、接種操作規(guī)范與使用后處理
1.接種操作要點：進行平板劃線接種時，用掛有菌液的接種環(huán)在培養(yǎng)基表面輕輕劃動，力度以不劃破培養(yǎng)基為宜；進行液體接種時，將接種環(huán)直接浸入目標培養(yǎng)基，輕輕旋轉(zhuǎn)后取出，確保液體全融入培養(yǎng)基。接種過程需在超凈工作臺內(nèi)完成，操作時間盡量縮短，減少空氣雜菌污染概率。
2.使用后清潔與滅菌：接種完畢后，立即將接種環(huán)灼燒滅菌，待環(huán)體冷卻后，用無菌水沖洗環(huán)體表面殘留的培養(yǎng)基，再次灼燒至紅熱狀態(tài)，確認無殘留后放置在接種環(huán)架上冷卻備用。
3.常見誤區(qū)規(guī)避：禁止用接種環(huán)反復(fù)攪拌液體培養(yǎng)基，防止環(huán)體變形影響掛液精度；避免未冷卻的接種環(huán)直接接觸菌液，造成菌體熱死亡；不可用手觸碰接種環(huán)任何部位，防止污染或燙傷。
10ul接種環(huán)的正確使用需兼顧滅菌完整性、掛液精準性與操作規(guī)范性，只有嚴格遵循流程，才能保障微生物實驗數(shù)據(jù)的可靠與穩(wěn)定。
